Công Ty Cổ Phần Dịch Vụ Tin Cậy

MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VI SINH NBB®-A AGAR

1. Vai trò của vi sinh NBB®-A Agar trong sản xuất bia

Các vi khuẩn axit lactic gram dương như: Lactobacillus brevis, Lactobacillus lindneri và Pediococcus damnosus gây ra khoảng 70 – 80% ô nhiễm trong các nhà máy bia. Ngoài ra, các vi khuẩn gram âm như: Pectinatus spp. và Megasphaera spp. gây ra khoảng 3 – 7% ô nhiễm vi khuẩn và cùng với vi khuẩn axit lactic tạo thành nhóm vi khuẩn làm hỏng bia. Do đó, việc kiểm soát vi sinh của quá trình sản xuất bia là một công đoạn vô cùng quan trọng trong công nghệ sản xuất bia hiện nay. Với vi sinh NBB®-A Agar, vi khuẩn làm hỏng bia có thể được phát hiện định lượng trong nước rửa, trong bia, trong hệ thống khí nén và trong không khí xung quanh.

Các sản phẩm NBB® cho phép thực hiện kiểm soát vi sinh trên tất cả các mẫu của quy trình sản xuất bia một cách đơn giản, nhanh chóng và toàn diện. NBB® cũng đã được ứng dụng thành công tại các nhà máy bia trong 30 năm và đã thành lập các bộ sưu tập các phương pháp tiêu chuẩn khác nhau như: MEBAK và EBC.

2. Môi trường nuôi cấy vi sinh NBB®-A Agar

Sản phẩm môi trường nuôi cấy vi sinh NBB Agar của Dohler – Đức:

NBB là môi trường nuôi cấy vi sinh sử dụng cho việc phát triển và định lượng các vi sinh vật làm hư hỏng bia. Dòng sản phẩm này thường được dùng trong ngành công nghiệp bia rượu.

NBB Agar (NBB-A) là môi trường thạch rắn có thể dễ dàng đổ ra đĩa petri sau khi hóa lỏng.

  • Giảm thời gian chuẩn bị bằng cách hóa lỏng trực tiếp trong chai
  • Đơn giản, trực quan, kiểm tra kết quả của quá trình bằng việc chuyển đổi từ đỏ sang vàng của NBB-A

Quy cách đóng gói: 01 thùng 09 chai (250ml x 09)

  • Hướng dẫn sử dụng sản phẩm:

Dưới đây, Tin Cậy sẽ hướng dẫn quý khách các bước thực hiện phát hiện vi khuẩn gây hỏng bia bằng môi trường NBB Agar

Chuẩn bị đĩa NBB Agar

Hóa lỏng chai NBB Agar bằng bể ổn nhiệt ở 900 C trong thời gian khoảng 40 – 45 phút. Sau đó, để NBB Agar nguội khoảng 40 – 450C.

Lưu ý: Không để NBB Agar hóa lỏng trong bể ổn nhiệt ở 450C hơn 4 giờ. Điều này sẽ làm phá vỡ cấu trúc thạch và đặc tính hóa rắn của nó. Tránh hóa lỏng quá lâu và nhiều lần ở 900 C nếu không thì các thành phần tăng trưởng có thể bị hỏng. Không sử dụng lò vi sóng để hóa lỏng NBB Agar.

Lấy chai Agar đã nguội tới 45oC, vô trùng bàn làm việc và sắp xếp các đĩa petrifilm cần thiết (xem xét đường kính các đĩa petrifilm cần thiết cho việc thử nghiệm). Sau đó rót NBB Agar vào đĩa petrifilm, để nguội và tránh sự ngưng tụ của hơi nước.

Phát hiện vi khuẩn gây hỏng bia bằng màng lọc

Bước 1: Xác định rõ ràng thể tích phù hợp của một mẫu bia bạn muốn kiểm tra. Sử dụng hệ thống lọc màng để lọc mẫu bia trên một bộ lọc màng phù hợp. Xin lưu ý hướng dẫn của nhà sản xuất trên hệ thống lọc màng.

Đối với vi khuẩn làm hỏng bia kỵ khí nghiêm ngặt (ví dụ: Pectinatus spp.) thì bộ lọc phải được rửa nhanh bằng CO₂ để loại bỏ oxy khỏi bộ lọc.

Sau đó chuyển bộ lọc màng sang tấm NBB®-A Agar bằng nhíp vô trùng. Đặt bộ lọc màng lên bề mặt của tấm NBB®-A Agar cẩn thận để tránh bọt khí.

Hình 4. Chuyển bộ màng lọc sang đĩa NBB Agar bằng nhíp vô trùng

Bước 2: Ủ các tấm NBB®-A Agar bằng màng lọc trong điều kiện yếm khí (trong bình kỵ khí) khoảng 5 – 7 ngày ở 27 ± 2 °C trong tủ ấm. Thời gian ủ bệnh sẽ cần được kéo dài cho một số vi khuẩn làm chậm phát triển bia. (ví dụ: Lactobacillus lindneri).

Bước 3: Sự thay đổi màu từ đỏ sang vàng cho thấy sự tăng trưởng của vi khuẩn gây hư hỏng bia. Dùng kính hiển vi hoặc phân tích PCR để xác định vi khuẩn.

Phát hiện vi khuẩn gây hỏng bia bằng phương pháp trang và cấy

Bước 1:

  • Phương pháp trang: dùng micropipette hút 150µl mẫu cho vào đĩa môi trường NBB Agar. Sau đó dùng que trang, trang đều khắp mặt đĩa

Hình 7. Dùng que trang, trang đều mẫu khắp bề mặt thạch

Phương pháp cấy ria: nhúng que cấy vô trùng vào men nuôi cấy đã đồng nhất sau đó dùng que này cấy ria vào đĩa petrifilm. (như hình 9 bên dưới)

Hình 8. Dùng que cấy vòng cấy ria lên bề mặt thạch

Bước 2: Ủ các đĩa NBB®-A Agar trong điều kiện yếm khí (trong bình kỵ khí) khoảng 5 – 7 ngày ở 27 ± 2 ° C trong tủ ấm. Thời gian ủ sẽ cần phải được kéo dài đối với một số vi khuẩn làm hỏng bia phát triển chậm (ví dụ: Lactobacillus lindneri).

Bước 3: Sự thay đổi màu từ đỏ sang vàng cho thấy sự tăng trưởng của vi khuẩn gây hư hỏng bia. Dùng kính hiển vi hoặc phân tích PCR để xác định vi khuẩn

Phát hiện vi khuẩn gây hỏng bia trong mẫu không khí

Bước 1: Xác định đường kính đĩa Agar phù hợp với thể tích mẫu khí. Sử dụng mẫu khí theo hướng dẫn của nhà sản xuất và thu thập thể tích cần có của không khí môi trường trên đĩa. Dán nhãn đĩa Agar

Bước 2: Ủ trong điều kiện kỵ khí khoảng 5 ngày ở 27oC ± 2°C. Nếu quá trình ủ kéo dài hơn 5 ngày thì những vi sinh vật không xác định cũng sẽ được làm giàu theo. Do đó luôn phân tích đĩa Agar sau 5 ngày.

Bước 3: Sự thay đổi màu từ đỏ sang vàng cho thấy sự tăng trưởng của vi khuẩn đặc trưng gây hỏng bia. Kỹ thuật phân tích xa hơn như kính hiển vi hay PCR có thể được sử dụng để nhận diện vi khuẩn.

Phát hiện vi khuẩn gây hỏng bia trong mẫu CO2  và khí nén

Bước 1:

  • Lấy mẫu CO2và khí nén: Đổ đầy chai vô trùng với 50 ml nước vô trùng, khử trùng đầu ra outlet  hệ thống CO2 và khí nén bằng alcohol 70%. Sau đó, nhúng outlet vào nước vô trùng, cho khí nén và CO2 chảy chậm vào nước khoảng 15s, tránh khí bắn ra ngoài. Hầu hết vi sinh vật được tìm thấy ở mặt trong của ống.
  • Màng lọc: Sử dụng hệ thống màng lọc để lọc mẫu nước đã sục khí trên. Với vi khuẩn kỵ khí plush qua màng với CO2. Sau đó chuyển màng vào đĩa NBB®-A Agar. Dán nhãn đĩa Agar, dùng nhíp vô trùng chuyển màng lọc trên lên bề mặt đĩa Agar, cẩn thận tránh tạo bóng khí.

Bước 2: Ủ trong điều kiện kỵ khí trong 5-7 ngày ở 27oC ± 2°C. Thời gian ủ có thể mở rộng thêm đối với các loại vi khuẩn tăng trưởng chậm như: Lactobacillus Lindnery.

Bước 3: Sự thay đổi màu từ đỏ sang vàng cho thấy sự tăng trưởng của vi khuẩn đặc trưng gây hỏng bia. Dùng kính hiển vi hoặc phân tích PCR để xác định vi khuẩn.

Phát hiện vi khuẩn gây hỏng bia bằng phương pháp đổ đĩa

Bước 1: Sử dụng pipet để thêm các mẫu bia vào đĩa petrifilm (không vượt quá khối lượng mẫu tối đa, chi tiết như bảng bên dưới). Sau đó, đổ NBB Agar vào đĩa, xoay đĩa petrifilm nhẹ nhàng nhiều lần để phối trộn mẫu và thạch. Cẩn trọng không cho thạch văng lên nắp hoặc đổ ra ngoài.

Hình 11. Dùng micropipette hút mẫu cho vào đĩa petri

Hình 12. Đổ môi trường NBB Agar vào đĩa petri

Hình 13. Đậy nắp, xoay nhẹ đĩa petri để phối trộn mẫu và thạch

Bước 2: Ủ các đĩa NBB®-A Agar trong điều kiện yếm khí (trong bình kỵ khí) khoảng 5 – 7 ngày. Nhiệt độ ở 27 ± 2 ° C trong tủ ấm.

Thời gian ủ sẽ cần phải được kéo dài đối với một số vi khuẩn làm hỏng bia phát triển chậm. (ví dụ: Lactobacillus lindneri).

Bước 3: Sự thay đổi màu từ đỏ sang vàng cho thấy sự tăng trưởng của vi khuẩn gây hư hỏng bia. Dùng kính hiển vi hoặc phân tích PCR để xác định vi khuẩn

Môi trường nuôi cấy vi sinh NBB®-A Agar Dohler được cung cấp bởi:

CÔNG TY CỔ PHẦN ĐẦU TƯ THƯƠNG MẠI DỊCH VỤ TIN CẬY

Địa chỉ: Số 4, Đường số 3, Khu dân cư Vạn Phúc, P. Hiệp Bình Phước, Q. Thủ Đức, Tp. HCM

Điện thoại: (028) 2253 3535 –  0358 871 302 – 0909 307 123 – 0903 908 671

Email: kinhdoanh@tincay.com; tincaygroup@gmail.com; tincay@tincay.com

bài viết liên quan

Copyright © 2017 by tincay.com. All right reserved.

Translate »