Phương Pháp Định Lượng Tổng Vi Khuẩn Hiếu Khí Trong Thực Phẩm

1. Vi khuẩn hiếu khí là gì?

Trước khi tìm hiểu về các phương pháp định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm, chúng ta tìm hiểu khái niệm cơ bản về vi khuẩn hiếu khí là gì?

Vi khuẩn hiếu khí là vi khuẩn tăng trưởng và hình thành khuẩn lạc trong điều kiện có sự hiện diện của oxy phân tử.

Tổng số vi khuẩn hiếu khí hiện diện trong mẫu phản ánh vệ sinh chế biến, độ tươi mới hay nguy cơ gây hư hỏng của thực phẩm.

Đây cũng là một trong những chỉ tiêu trong kiểm tra vệ sinh thực phẩm trong quá trình sản xuất, vận chuyển và bảo quản. Chỉ tiêu này được xác định bằng phương pháp đếm khuẩn lạc mọc trên môi trường thạch dinh dưỡng; thể diện dưới dạng số đơn vị hình thành khuẩn lạc (colony forming unit, CFU) trong một đơn vị khối lượng hay thể tích thực phẩm.

2. Phương pháp định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí bằng việc nuôi cấy trên bề mặt thạch

Tổng số vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm có thể được xác định bằng phương pháp nuôi cấy trên bề mặt thạch. Hoặc phương pháp hộp đổ thông qua số lượng khuẩn lạc đếm được trên đĩa petrifilm.

Các phương pháp này cho phép xác định lượng vi sinh vật có khả năng sinh trưởng trong môi trường mẫu ban đầu. Ngoài ra, hiện nay còn có các vật tư, dụng cụ hỗ trợ kiểm tra tổng số vi khuẩn hiếu khí nhanh hơn như đĩa petrifilm, dipslide,…

Các bước thực hiện:

Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm
Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm

Chuẩn bị môi trường nuôi cấy – môi trường nuôi cấy tổng vi khuẩn hiếu khí: Plate Count Agar (PCA), pH = 7

Môi trường được nấu sôi cho tan agar, chia vào bình tam giác và hấp tiệt trùng ở 1210C/ 20 phút, để nguội sau đó đổ môi trường vào đĩa petri.

Ngày nay, ta có thể mua môi trường đông khô thương phẩm của các hãng sản xuất như Merck – Đức, Oxoid – Anh Quốc, Difco – Mỹ,…Để hạn chế quá trình chuẩn bị môi trường mất nhiều thời gian và hít nhiều hóa chất. Tin Cậy cũng cung cấp tất cả các môi trường nuôi cấy vi sinh.

Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm
Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm

Đồng nhất và pha loãng mẫu

  • Mẫu thực phẩm được cắt nhỏ hoặc xay nhuyễn trong điều kiện vô trùng cho tới khi được đồng nhất.
  • Cân chính xác 10g (hoặc 10ml) thực phẩm đã được chuẩn bị cho vào bình tam giác có chứa 90ml đệm pepton. Sau đó, lắc đều 2 – 3 phút thu được dung dịch mẫu thử ở 10-1
  • Hút 1ml dung dịch mẫu thử ở 10-1 sang ống nghiệm có chứa sẵn 9ml đệm pepton. Sau đó, lắc đều 2 – 3 phút, thu được dung dịch mẫu thử 10-2 . Tiếp tục làm tương tự để có dung dịch pha loãng tiếp theo.

Đổ đĩa và ủ mẫu

  • Dùng pipet hút 1ml mẫu thử cho vào đĩa petri, sau đó đổ 10 – 15ml môi trường đã pha vào đĩa
  • Xoay nhẹ đĩa petri theo hai chiều trái, phải để trộn đều mẫu
  • Để thạch đông, lật ngược đĩa và ủ ấm ở 370C trong thời gian 72 giờ

Đếm khuẩn lạc

Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm
Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm

Sau thời gian ủ, thực hiện đếm khuẩn lạc, có thể đếm bằng mắt thường hoặc máy đếm khuẩn lạc

Tính số lượng khuẩn lạc theo công thức

Trong đó:

N là số tế bào vi khuẩn trong 1g hay 1ml mẫu (CFU: colony forming units)

C: Tổng số khuẩn lạc đếm được trên các hộp petri đã chọn (khoảng từ 25 – 250 khuẩn lạc/ đĩa)

Ni: số hộp petri cấy tại độ pha loãng thứ nhất

di: hệ số pha loãng tương ứng

v: thể tích dịch mẫu (ml) cấy vào trong mỗi đĩa

3. Một số phương pháp định lượng vi khuẩn hiếu khí ưu việt hiện nay

Ngày nay, để tiết kiệm thời gian và đẩy nhanh mẫu vào quá trình sản xuất; người ta sử dụng phương pháp petrifilm và dùng dipslide chỉ với 3 bước thực hiện: chuẩn bị mẫu, ủ mẫu và đọc kết quả.

Phương pháp dùng đĩa petrifilm:

Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm
Định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm

Đĩa petrifilm là đĩa cấy chứa môi trường dinh dưỡng khô. Ngoài ra còn có chất chỉ thị màu đặc trưng và chất tạo đông tan được trong nước lạnh. Để tăng khả năng quan sát sự phát triển của khuẩn lạc. Vùng sinh trưởng được khoanh tròn trên mỗi đĩa chứa khoảng 20 ô vuông. Mỗi ô có diện tích khoảng 1cm2 trên màng nền.

Người sử dụng có thể cấy trực tiếp 1ml mẫu vào đĩa mà không cần trải qua công đoạn chuẩn bị môi trường và đổ đĩa. Do đó, giảm bớt được sai số trong quá trình thực hiện.

Đĩa được sản xuất theo quy trình được chứng nhận tiêu chuẩn ISO 9000 và quy trình quản lý chất lượng khắt khe của Official Methods of Analysis, AOAC. Ngoài ra, đĩa petrifilm còn có kẻ các ô vuông trên đĩa nhằm hỗ trợ việc đếm khuẩn lạc nhanh, rõ ràng, đồng nhất. Đặc biệt hơn, đĩa petrifilm chỉ cho các vi khuẩn hiếu khí mọc trên đĩa như vi khuẩn Staphylococcus, Bacillus subtilis, Escherichia coli,…

Việc sử dụng đĩa này đem lại nhiều lợi ích cho người sử dụng: nhỏ gọn, cải tiến, dễ sử dụng, tiết kiệm thời gian và nhân công. Hạn chế việc hít phải hóa chất độc hại, đẩy nhanh việc đưa nguyên liệu vào sản xuất.

Phương pháp sử dụng dipslide:

Hiện nay, việc sử dụng dipslide kiểm tra tổng vi khuẩn hiếu trong các dung dịch nhũ tương như dầu, nước, tương,…cũng được áp dụng khá phổ biến.

Cách sử dụng và các bước tiến hành đã được Tin Cậy giới thiệu trong bài đọc “Test nhanh vi khuẩn bằng Dipslide”


Mọi thắc mắc về” Phương pháp định lượng tổng vi khuẩn hiếu khí trong thực phẩm”, xin vui lòng liên hệ:

CÔNG TY CỔ PHẦN ĐẦU TƯ THƯƠNG MẠI DỊCH VỤ TIN CẬY

Địa chỉ: Số 4, Đường số 3, Khu Dân Cư Vạn Phúc, P. Hiệp Bình Phước, Tp.Thủ Đức, Tp.HCM

Điện thoại: (028) 2253 3535  – 0358 871 302 – 0902 671 281 – 0902 701 278 – 0903 908 671

Email: baotran@tincay.com; kinhdoanh@tincay.com; tincay@tincay.com

Website: tincay.com | thuysantincay.com | nongnhan.com

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *